SEKWENCJONOWANIE - SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY(3).pdf - genetyka (xyzgeo) - xyzgeo

SEKWENCJONOWANIE SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY

file:///C:/Users/Madzia/Desktop/Nowy%20folder%20%20materialy...

SEKWECJOOWAIE SĄ JUŻ DO TEGO MASZYY.

Sekwencjonowanie metoda , dzięki której możliwe jest ustalenie sekwencji czyli

określenie kolejności nukleotydów. Jeden z etapów analizy genu. Na podstawie

sekwencji istnieje możliwość przewidzenia kolejności aminokwasów w białku , które

jest kodowane przez dany gen.

Są dwie metody sekwencjonowania :

Enzymatyczna metoda Sangera

Na jednoniciowej matrycy syntetyzuje się IN VITRO DNA. Syteza przebiega od

radioaktywnego , oligonukleotydowego startera komplementarnego do 3` końca

matrycy. Reakcję wykonuje się równolegle w czterech probówkach , w których

oprócz kompletu deoksytrifosforanów nukleotydów (dATP , dCTP , dTTP , dGTP)

dodana jest niewielka ilość jednego z nich w postaci dideoksytrifosforanu nukleotydu

, co uniemożliwia kontynuowanie reakcji w momencie włączenia takiego nukleotydu

w syntetyzowany łańcuch , ponieważ brakuje wtedy grupy hydroksylowej na 3`

końcu.

1 z 5

20100404 13:23

SEKWENCJONOWANIE SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY

file:///C:/Users/Madzia/Desktop/Nowy%20folder%20%20materialy...

Synteza zostaje zahamowana losowo powstaje mieszanina fragmentów o różnej

długości.

2 z 5

20100404 13:23

SEKWENCJONOWANIE SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY

file:///C:/Users/Madzia/Desktop/Nowy%20folder%20%20materialy...

Produkty reakcji poddawane są elektroforezie w czterech

równoległych ścieżkach na żelu poliakrylamidowym. Pozwala to

na ustalenie sekwencji nici komplementarnej do badanej.

Chemiczna metoda MaxamaGilberta

Jest to metoda praktycznie już nie stosowana.

Polega na degradacji wyznakowanych na 5` końcu cząsteczek DNA związkami

chemicznymi przecinającymi specyficznie wiązania fosfodiestrowe za nukleotydem

odpowiadającym określonej zasadzie azotowej. Wynikiem reakcji jest zbiór

fragmentów DNA o różnej długości co spowodowane jest takim doborem warunków ,

że w poszczególnych cząsteczkach przecinane jest tylko jedno lub dwa wiązania.

Fragmenty z czterech niezależnych reakcji (dGTP , dGTP i dATP , dCTP , dCTP i

dTTP) rozdziela się elektroforetycznie po czym poddaje autoradiografii. Prążki na

3 z 5

20100404 13:23

SEKWENCJONOWANIE SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY

file:///C:/Users/Madzia/Desktop/Nowy%20folder%20%20materialy...

autoradiogramie odpowiadają fragmentom DNA posiadającym na końcu 5`

znakowany fosfor a na końcu 3` określoną zasadę.

Obydwie metody pozwalają na odczytanie sekwencji około 400 do 700 nukleotydów

w jednym doświadczeniu. Jeśli sekwencjonujemy dłuższy odcinek należy go pociąć

enzymem restrykcyjnym i ustalać sekwencję każdego fragmentu osobno.

4 z 5

20100404 13:23

SEKWENCJONOWANIE SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY

file:///C:/Users/Madzia/Desktop/Nowy%20folder%20%20materialy...

IZOLACJA Z ŻELU CZYLI JAK ODZYSKAĆ DNA

PCR

5 z 5

20100404 13:23

SEKWENCJONOWANIE - SĄ JUŻ DO TEGO MASZYNY(3).pdf

Plik z chomika:

Inne pliki z tego folderu:

Inne foldery tego chomika: