BK3.pdf

REAKCJA FEULGENA-ROSENBECKA

● opracowana w 1924 r. przez Feulgena i Rosenbecka

● jedyna pozwalająca na specyficzne rozpoznanie DNA w chromatynie jąder interfazowych i

w chromosomach komórek roślinnych i zwierzęcych, powszechnie stosowana do

wykazania obecności DNA

● barwnik – fuksyna lub pararozanilina (oczyszczona fuksyna), zredukowana

(zsulfonowana) pirosiarczanem sodu lub potasu do bezbarwnej, nietrwałej (łatwo się utlenia

tlenem z powietrza na świetle, musi być przechowywana w ciemności i w niskiej

temperaturze, w szczelnie zamkniętych pojemnikach) leukofuksyny ( odczynnika Schiffa );

przed redukcją fuksyna i pararozanilina są czerwone (leukofuksyna czerwona po utlenieniu)

● etap I : łagodna hydroliza wiązań N-glikozydowych pomiędzy dezoksyrybozą i

zasadami w utrwalonym materiale – odczepienie zasad purynowych (powstaje apurynowy

DNA), a następnie pirymidynowych; także usuwanie innych związków o charakterze

aldehydowym (np. RNA), dzięki czemu reakcja jest specyficzna; po zbyt krótkiej

hydrolizie uwalnia się za mało grup aldehydowych, a w czasie zbyt długotrwałej następuje

hydroliza wiązań estrowych i usunięcie histonów i DNA (czas musi być odpowiednio

ustalony)

● etap II : reakcja uwolnionych grup aldehydowych (przy C1 dezoksyrybozy) z

odczynnikiem Schiffa , w wyniku czego powstaje czerwono-fioletowy produkt

● dla prawidłowego przebiegu konieczne spełnienie warunków: eksperymentalne ustalenie

optymalnego czasu hydrolizy (zależy przede wszystkim od zastosowanego utrwalacza);

dobre przygotowanie odczynnika Schiffa (musi być bezbarwny); eksperymentalne

ustalenie optymalnego czasu reakcji z odczynnikiem Schiffa

● pozwala też na dokonanie ilościowej analizy DNA metodami spektrofotometrycznymi

(absorbcja światła widzialnego o długości ok. 540 nm) – DNA cytofotometria, DNA

cytometria obrazowa (przepływowa); możliwa do sprawdzenia ploidia komórek

REAKCJA PAS

● służy do wykrywania wszystkich związków zawierających cukry u zwierząt i roślin (u

roslin tylko w skrawkach, kwas jodowy nie penetruje tkanki)

● zastosowanie kwasu nadjodowego i odczynniku Schiffa , zabarwiającego się na kolor

różowy

● po zbyt długim czasie utleniania zabarwiają się błony i struktury błoniaste (nienasycone

lipidy, fosfolipidy)

● do wybarwienia konkretnego cukrowca konieczne wypłukanie innych lub ustalenie bardzo

konkretnego czasu utleniania

● wykorzystywana w diagnostyce chorób związanych z nieprawidłowym metabolizmem

cukrów

CYKL KOMÓRKOWY

● cykl życiowy = ontogeneza

● cykl komórkowy – sekwencja etapów, przez które przechozi komórka od powstania do

zakończenia podziałów; interfaza (G1, S, G2; trwa od 2h do 20h) i mitoza (trwa ok. 2h)

● G1 : intensywny metabolizm, wzrost (komórka jest mała po podziale)

● S : namnażanie materiału genetycznego, histonów

● G2 : synteza białek wrzeciona podziałowego, naprawa DNA