Sekwencjonowanie DNA(1).pdf

Sekwencjonowanie DNA

Polega na ustaleniu kolejno ś ci par zasad w

badanej cz ą steczce DNA.

Obecnie najcz ęś ciej wykorzystywan ą jest metoda

Sangera polegaj ą ca na enzymatycznej syntezie

cz ą steczek DNA.

•Reakcje prowadzi si ę w czterech probówkach. Do

ka ż dej mieszaniny reakcyjnej dodaje si ę inne,

dideoksynukleotydy które nie posiadaj ą grupy -OH

przy 3’ w ę glu. Doł ą czenie nukleotydu bez grupy 3’-

OH uniemo ż liwia doł ą czanie kolejnych

•W probówce z dideoksy- ATP uzyskuje si ę

fragmenty ró ż nej długo ś ci maj ą ce na ko ń cu

dideoksy-ATP.

•Po elektroforezie w wysokorozdzielczym ż elu

poliakrylamidowym, uzyskujemy uporz ą dkowany

wzór pr ąż ków rozdzielonych pod wzgl ę dem

wielko ś ci.

OH uniemo ż liwia doł ą czanie kolejnych

nukleotydów. W ten sposób powstaj ą fragmenty o

ró ż nej długo ś ci.

Automatyczne sekwencjonowanie

Analiza wyników sekwencjonowania