Wykrywanie obecności enzymów - wnioski.doc

Wnioski

Preparat enzymatyczny przygotowany z świeżo utartego chrzanu wykazywał dużo większą aktywność niż preparat przygotowany (wg ćw. 3) z suszonej pietruszki. Świadczyło o tym dużo intensywniejsze zabarwienie roztworów w probówkach oraz pojawienie się w nich piany. Zmiana koloru nastąpiła zaraz po dodaniu odczynników natomiast w probówkach z preparatem z pietruszki powolna zmiana barwy nastąpiła po ok. 2 min. Większa aktywności preparatu z chrzanu jest spowodowana większą zawartością hydroperoksydaz , a także tym, że w świeżym chrzanie występowały również oksydazy. Pietruszka po ekstrakcji i suszeniu pozbawiona była oksydaz i w preparacie znajdowały się same hydroperoksydazy. Poza tym ilość pietruszki wykorzystanej do przygotowania preparatu była mniejsza niż ilość chrzanu.

W probówkach z preparatem ze świeżo utartego chrzanu powstało dużo gęstej piany. Jest to dowód na obecność katalaz, które w reakcji z H2O2 powodują powstanie tlenu. Ilość powstałej piany świadczy o tym, że katalaza z korzenia chrzanu jest bardzo aktywna. Brak piany w probówkach z preparatem z pietruszki spowodowany jest brakiem katalaz, lub ich bardzo małym stężeniem.

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Wnioski do części 5 w lab „wykrywanie obecności enzymów”

5a)

Po dodaniu H2O2 do probówek z ekstraktem ziemniaczanym i chrzanem w obu przypadkach zaobserwowano wydzielenie tlenu, jednak w ekstrakcie z ziemniaka wydzielenie to było intensywniejsze. Możemy zatem wywnioskować, że wyciąg z ziemniaka zawierał większe stężenie katalazy.

5b)

ü      Po ogrzaniu do wrzenia:

Nie zaobserwowano wydzielenia tlenu (brak piany). Powodem jest denaturacja białka enzymu spowodowana wysoką temperaturą.

ü      Po wstawieniu na 15 minut do lodówki:

W obu probówkach zaobserwowano wydzielenie piany. Spodziewano się, że będzie ono jednak nieznaczne, a na pewno mniej intensywne niż w doświadczeniu 5a) jednak z powodu dodania większej ilości H2O2 obserwowana piana była porównywalna. Można stąd wywnioskować, że katalaza jest aktywna nawet w obniżonej temperaturze.

ü      Po dodaniu NaCN:

W obu przypadkach zaobserwowano nieznaczne wydzielenie tlenu. NaCN zahamował częściowo działanie katalazy (jony CN- są inhibitorami) nieznaczne pojawienie się piany może świadczyć o dużym nadmiarze katalazy w stosunku do użytego inhibitora, poprzez co nie wszystkie cząsteczki enzymu utraciły swą aktywność.

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Zadanie 4

Porównanie wrażliwości oksydaz i peroksydaz na temperaturę

1 probówka – po ogrzaniu dodano 10 kropli pirokatechiny – jasny kolor brązowy

2 probówka-po ogrzaniu dodano 10 kropli pirokatechiny oraz 10 kropli H2O2– ciemny kolor brązowy; brak piany

Wnioski:

Po dodaniu odczynników do probówek zaobserwowano zmianę zabarwienia jednak było ono słabsze niż w przypadku tych samych prób, które nie były poddane działaniu wysokiej temperatury. Jasny kolor roztworu w probówce pierwszej świadczy o  słabym utlenieniu pirokatechiny przez oksydazy, a wynika to z faktu małej odporności tych enzymów na wysoka temperaturę.

W przypadku probówki numer 2 obserwowano zmianę zabarwienia na ciemniejszy kolor brązowy co wynika z powstania chinonów w wyniku utlenienia pirokatechiny co potwierdza fakt, że peroksydazy są mało wrażliwe na działanie wysokiej temperatury. Peroksydazy wykorzystują nadtlenek wodoru w reakcji utlenienia pirokatechiny. Nie zaobserwowano piany nad roztworem w probówce co świadczy o braku katalaz, które zaobserwowano w próbach nie poddanych ogrzewaniu w łaźni wodnej. Z tego wynika, że katalazy są wrażliwe na wysoką temperaturę.

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Zadanie 6.

Chrzan słoiczkowy zalano wodą destylowaną, następnie przesączono.

WNIOSKI

Zaobserwowana zmiana zabarwienia w próbie z pirokatechiną oraz pirogalolem świadczy o wytworzeniu się chinonów, a zatem obecności enzymów takich jak hydroperoksydazy i oksydazy. Ponieważ jednak dodawaliśmy nadtlenku wodoru badaliśmy w tym doświadczeniu głównie peroksydazy. O występowaniu tych enzymów mówi nam także uzyskanie koloru granatowego w próbie z benzydyną.

W porównaniu do chrzanu tartego zabarwienie okazało znacznie mniej intensywne oraz w przypadku chrzanu słoiczkowego nie zaobserwowano piany.

Brak piany jest to informacja, że w roztworze nie występują katalazy, zaś jaśniejszy kolor świadczy o tym, że zawartość tych enzymów jest mniejsza niż w świeżym chrzanie. Najprawdopodobniej są to skutki przetwarzania chrzanu w procesie przemysłowym (np. obróbka termiczna, konserwanty).

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Wnioski do części 5 w lab „wykrywanie obecności enzymów”

5a)

Po dodaniu H2O2 do probówek z ekstraktem ziemniaczanym i chrzanem w obu przypadkach zaobserwowano wydzielenie tlenu, jednak w ekstrakcie z ziemniaka wydzielenie to było intensywniejsze. Możemy zatem wywnioskować, że wyciąg z ziemniaka zawierał większe stężenie katalazy.

5b)

ü      Po ogrzaniu do wrzenia:

Nie zaobserwowano wydzielenia tlenu (brak piany). Powodem jest denaturacja białka enzymu spowodowana wysoką temperaturą o której świadczy wytrącenie się kłaczków osadu.

ü      Po wstawieniu na 15 minut do lodówki:

W obu probówkach zaobserwowano wydzielenie piany. Spodziewano się, że będzie ono jednak nieznaczne, a na pewno mniej intensywne niż w doświadczeniu 5a) jednak z powodu dodania większej ilości H2O2 obserwowana piana była porównywalna. Można stąd wywnioskować, że katalaza jest aktywna nawet w obniżonej temperaturze.

ü      Po dodaniu NaCN:

W obu przypadkach zaobserwowano nieznaczne wydzielenie tlenu. NaCN zahamował częściowo działanie katalazy (jony CN- są inhibitorami) nieznaczne pojawienie się piany może świadczyć o dużym nadmiarze katalazy w stosunku do użytego inhibitora, poprzez co nie wszystkie cząsteczki enzymu utraciły swą aktywność.

----------------------------------------------------------------------------------------------------------------