BK2.pdf

TECHNIKI I METODY W BIOLOGII KOMÓRKI

 przygotowanie do obserwacji:

1. utrwalanie (np. alkoholami, aldehydami, acetonem, kwasami, związkami met. ciężkich)

2. zatapianie (przesączanie i utwardzanie)

3. krojenie (mikrotomem)

4. nakładanie na szkiełko lub siatkę (mikroskopia elektronowa)

5. (barwienie, gdy kontrast naturalny jest za słaby)

 typy barwienia: progresywne – do wysycenia; regresywne – przebarwianie i usuwanie

nadmiaru barwnika; w punkcie końcowym – niezależne od czasu ekspozycji; impregnacja

– z zastosowaniem soli metali; bezpośrednie – bez wstępnych procedur; pośrednie – po

wstępnych procedurach

 bejcowanie – procedura wstępna mająca na celu nadanie odpowiednich właściwości przed

barwieniem; środki bejcujące: kwasy, sole metali, substancje utleniające, ałuny

 typy barwników: kwaśne – barwią struktury zasadowe, np. cytoplazmę (np. eozyna);

zasadowe – barwią struktury kwaśne, np. jądro (np. hematoksylina przekształcająca się w

barwną po utlenieniu)

BARWIENIE I INNE TECHNIKI UŻYTECZNE DO OBSERWACJI:

 safranina + zieleń trwała: safranina barwi na czerwono zdrewniałe ściany komórkowe

(ksylem), a zieleń trwała na zielono cytoplazmę i struktury błonowe

 hematoksylina żelazista: barwi struktury kwaśne na szaro; bejcowana roztworem soli

żelaza

 hematoksylina Ehrlicha: barwi struktury kwaśne na fioletowo; utrwalana w środowisku

alkalicznym

 eozyna: rozbijana w wodzie na aniony, reaguje z białkami cytoplazmy

 błękit toluidyny: metachromazja (barwienie różnych struktur na różne kolory) – RNA

barwione na fioletowo (granatowo), a DNA na niebiesko (cytoplazma na fioletowo)

 metoda Unny: zieleń metylowa barwi na zielono jądro (chromosomy – DNA), a pyronina

cytoplazmę i jąderko (RNA) na różowo

 metody immunocytochemiczne: zastosowanie przeciwciał i markerów dla zobrazowania

odpowiedniej struktury

 autoradiografia: związek radioaktywny wbudowany w komórkę znakowany nad

preparatem przy użyciu emulsji światłoczułej (pozwala na prześledzenie drogi i czasu

transportu substancji w komórce); znacznik np. H3 tymidyna / H3 urydyna

 hybrydyzacja in situ: rozdzielenie DNA i wprowadzenie fluorescencyjnej sondy

molekularnej, która przyczepi się w konkretnej sekwencji DNA

 DAPI: barwi chromatynę na niebiesko (mikroskopia fluorescencyjna)

 falloidyna + fluorochrom (rodamina): fluorochrom łączy się z aktyną, dzięki czemu jest

ona widoczna (mikroskopia fluorescencyjna)