Temat:
Pozyskiwanie mikroorganizmów zdolnych do biodegradacji związków ksenobiotycznych – selekcja mikroorganizmów zdolnych do rozkładu katecholu oraz fenolu (cz. 1)
Zagadnienia teoretyczne:
q przypomnienie wiadomości z mikrobiologii ogólnej: typy podłoży bakteriologicznych i techniki posiewów
q pozyskiwanie mikroorganizmów do celów przemysłowych: zasady racjonalnego skriningu, sposoby zwiększania liczebności poszukiwanych mikroorganizmów,
q metody selekcji szczepów
q definicja ksenobiotyku
Część praktyczna:
Materiały:
Ø próba środowiskowa – woda pobrana z Kłodnicy oraz Rawy
Ø sterylna sól fizjologiczna
Ø płytki z zestaloną (agarem) pożywką Kojima ze zmniejszoną do 0,01 g/l ilością ekstraktu drożdżowego
Ø 0,25 M r-r fenolu
Ø 0,5 M r-r katecholu
Ø pipety automatyczne, sterylne końcówki
Ø głaszczka
Ø denaturat
Procedura:
q w warunkach sterylnych przygotować podłoża selekcjonujące poprzez dodanie takiej objętości 0,25 M roztworu fenolu lub 0,5 M roztworu katecholu, aby stężenie tych związków w podłożu wyniosło 1 mM (objętość pożywki wylanej na płytkę wynosi 10 ml).
q wysterylizowaną głaszczką delikatnie i dokładnie rozprowadzić przeniesioną objętość roztworówi odczekać 20 minut.
q w przerwie wykonać szereg rozcieńczeń próby środowiskowej 10-1 oraz 10-2.
q po upływie wyznaczonego czasu z rozcieńczenia 10-1 i 10-2 wysiać murawowo 0,1 ml.
q płytki inkubować w temperaturze 25oC przez 48-72 godzin.
W przypadku słabego wzrostu po upływie wymaganego czasu inkubacji okres hodowli można wydłużyć o kolejne 48 godzin. W przypadku uzyskania intensywnego wzrostu, w celu uniknięcia przerastania płytek i zestarzenia się hodowli, płytki należy przechować do kolejnych zajęć w lodówce.
LITERATURA ŹRÓDŁOWA:
Kasiaaa_aaa