07.04.2008r. (zacznij słuchać od 10 minuty)
Podział metod oznaczania aktywności enzymów
1. Spektrofotometryczne
a) hydrataza fumaranowa
b) dehydrogenazy sprzężone z NAD+ lub NADP+
2. Fluorometryczne
3. Monometryczne
4. Potencjometryczne
5. Z odbioru prób (np. kolorymetryczne)
6. Wiskozymetryczne
Oznaczanie aktywności
Stężenie substratów koenzymów musi być wysycające (maksymalna szybkość reakcji)
temp. 30°C i pH max
czas reakcji
1. wyznaczanie masy cząsteczkowej białka
wyliczenie masy cząsteczkowej na podstawie sekwencji aminokwasów (łatwo ustalić sekwencje kodonów w białku ale trudno sekwencje aminokwasów)
metoda sączenia molekularnego
oznaczanie masy cząsteczkowej w żelu poliakrylowym za pomocą elektroforezy
elektroforeza w żelu poliakrylowym (PAGE) w obecności SDS i 2 – merkaptoetanolu
RM – współczynnik ruchliwości elektroforetycznej
marker – błękit boromofenolowy
2. …
Black_Diamond87